I.T.C.A
“INSTITUTO TECNOLOGICO DE CIUDAD
ALTAMIRANO”
MATERIA: BIOTECNOLOGÍA APLICADA
TEMA: “Medios de cultivos definidos
e indefinidos”
ALUMNA: Deyanira Vergara Perez
MAESTRO: FRANCISCO JAVIER PUCHE ACOSTA
8vo. SEMESTRE LIC. BIOLOGÍA
FECHA: 2 de Marzo del 2012
MEDIOS DE CULTIVOS
DEFINIDOS
Contenido en macro sales de los medios más
importantes
(en mg 1-1).
MEDIOS DE CULTIVO COMUNES INDEFINIDOS
1.- Agar sangre:
Es un medio enriquecido que se utiliza además
para la investigación de los diversos tipos de hemólisis(α, ß ó gamma ). Se
utiliza para el crecimiento de estreptococos.
Para la preparación del agar sangre se puede
utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sódico o un preparado
enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La
adición de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que están
en el interior de los hematíes, pero sí puede añadir factores inhibidores del
crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que
puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que
se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolábiles. La sangre
utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al
5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies
(caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones hemolíticas o
contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias
inhibidoras del crecimiento de determinados gérmenes.
2.- Agar
chocolate:
El agar chocolate se obtiene calentando la
sangre antes de adicionarla al medio base. Por esta razón el agar chocolate
contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el
crecimiento: el factor X o hemina termoestable.
El agar chocolate es un medio destinado
principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y
Haemophilus, pero en él pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes.
El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más
enriquecidos si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en
la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente según las casas
comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen más de una docena de
compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas
extraordinarias. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse
medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados
microorganismos. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin, utilizado para el
aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido
al cual se ha añadido unamezcla de tres antibióticos específicos que impedirán
el crecimiento del resto de la flora acompañante.
3.-Agar MacConkey:
Es un medio utilizado para el aislamiento e
identificación de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram
positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias
por su contenido en sales biliares. En su composición lleva un azúcar (lactosa)
y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial. Los
gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que
hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Las colonias
lactosa negativas serán incoloras, apareciendo del mismo color que el medio
subyacente (naranja).
4.- Daucus carota L. y Nicotiana
langsdorffii L.
El cultivo indefinido de tejidos vegetales tumorales o callo1 de
Daucus carota* L. (zanahoria) y de Nicotiana glauca x Nicotiana
langsdorffii+ L. (tabaco) se logró, por primera vez, simultáneamente (1939)
en Francia por Gautheret y Nobecourt* y en EEUU por White+;
Por otra parte, Ball fue el pionero de la multiplicación
vegetativa in vitro o micropropagación (propagación vegetativa de
plantas mediante el cultivo in vitro de meristemos, yemas, cualquier
tejido u órgano de una planta, también denominado "explanto"), ya que
en 1946, obtuvo el desarrollo in vitro de plantas enteras a partir de
meristemos apicales de vástagos de Tropaeolum majus y de Lupinus
albus L.
Esta línea requiere que
el material a cultivar esté aséptico (esterilizado) y además que se cultive en
un medio nutritivo estéril, constituido principalmente por sales minerales de
macronutrientes y micronutrientes, vitaminas, hormonas (citoquininas y/o auxinas
principalmente), azúcar (sacarosa y/o glucosa entre otras), etc.
Los medios nutritivos pueden permanecer en estado líquido o bien
solidificarse con agar en base al tipo de cultivos in vitro a realizar
(callos, cultivos de células, meristemos, explantos, etc.).
Finalmente, el medio ya sembrado se deposita en cámara de
incubación o germinadora, equipada de factores ambientales controlados (luz,
temperatura, humedad relativa) u optimizados para cada tipo de cultivo a
realizar.
La propagación vegetativa in vitro o clonación puede ser una alternativa económicamente
rentable, frente a los métodos de multiplicación clásicos (el sexual:
germinación de semillas y el vegetativo o asexual: esqueje, injerto, acodo).
La micropropagación masiva de clones puede obtenerse vía
organogénesis directa, es decir, a partir de meristemo o yema (apical y/o
axilar) aislada de un vástago.
Esta vía aporta estabilidad genética o ausencia de mutaciones, y
también plantas libres de virus (saneamiento), mediante el cultivo de ápices
meristemáticos de vástago.
La vía indirecta o callo1, consiste en regenerar plantas a
partir de células desorganizadas y diferenciadas, pero siempre que éstas
reviertan al estado de meristemoide y/o embrioide. Sin embargo, la vía "callo" se utiliza
para obtener variantes somaclonales y mutantes, entre otros.
4.- Plantas medicinales y
gel de Alove vera (L.) N. L. Burm
Efectos estimulantes del crecimiento de extractos
acuosos de plantas medicinales y gel de Aloe vera (L.) N. L. Burm.
Los tratamientos empleados correspondieron a cada uno de los
extractos de las plantas medicinales estudiadas y gel de Aloe vera (L.)
N. L. Burm. y un tratamiento control que utiliza reguladores de crecimiento
sintéticos, para la brotación y enraizamiento. Cada repetición consistió en un
tubo de ensayo con el medio nutritivo adecuado para cada especie, donde se
sembró un explante por cada tubo. Se encontraron efectos estimulantes del
crecimiento en los extractos estudiados y correspondió al gel de A. vera
el mejor comportamiento, superior a los reguladores usados tradicionalmente, en
la formación de raíces. Este hecho demostró la posible presencia de actividad
auxínica en el mismo. El extracto de sauce (Salix humboldtiana Wild),
tuvo también un comportamiento satisfactorio en este aspecto, lo que corroboró
resultados anteriormente obtenidos. Sin embargo, ambos extractos no mostraron
indicios importantes de contar con actividad citoquinínica. En este caso, los
extractos de Plantago lanceolata L. y Plantago major L.
tuvieron un mejor comportamiento.
Estas fueron las siguientes:
Matricaria
recutita L.
Melissa
officinalis L.
Mentha
x piperita L.
Mentha
citrata L.
Artemisia absinthium L.
Orthosiphon
aristatus (Blume) Miq.
Se
utilizó como material vegetal básico explantes nodales de las diferentes
especies empleadas, cultivados in vitro sobre el medio nutritivo con 3 %
(p/v) de sacarosa y 0,8 % (p/v) de agar técnico N° 3. El medio se ajustó a pH
5,8. El medio Murashige y Skoog,5 se utilizó para las especies: M. recutita,
M. officinalis, A. absinthium y O. aristatus y para M.
piperita y M. citrata, se empleó el medio de Gamborg (Gamborg;
1976, citado por Pierik RL. Cultivo in vitro de plantas
superiores. Ed. Mundo Press; 1990). Se aplicaron las técnicas de cultivo de
tejidos según Rodríguez y otros (Metodologías obtenidas para la
propagación in vitro de plantas medicinales en la Estación Experimental
de Plantas Medicinales " Dr. Juan Tomás Roig ". Cuba; 2001).
5.- Preparación del agua de coco para
usarse en los medios de cultivos vegetales
1. Consiga cocos pelados recién cosechados y maduros
2. Perforarlos con pequeños orificios en la parte final de la nuez
3. Drene separadamente el líquido de cada nuez en un vaso del laboratorio
examínelos ante de combinarlos con otros recipientes
4. Cuele el líquido empleando dos o tres capaz de lienzo para extraer la
fibra
5. Coloque el agua en un matraz, tápela con algodón y esterilizarla en la
autoclave a 15 libras durante 20 minutos
6. Después dejar que el agua se enfrié
7. Filtrar con papel filtro whatman no. 2; primero se decanta el líquido
claro de la parte superior y finalmente la porción que contiene el
precipitado flocúlenlo
8. Recombinar las porciones, mezclarlas bien y colocar agua en cajas o
recipientes de congelador
9. Almacenarlas estas cajas para cuando se necesiten
10.
Cuando se prevé el uso del AC se descongela en un
recipiente calentando con agua tibia y transfiriendo el contenido a un vaso de
acero
11.
Se cuela el AC tres o cuatro capas de lienzo y se
distribuye en botellas
BIBLIOGRARFIA
webpages.ull.es/users/apice/pdf/311-086.pdf
bvs.sld.cu/revistas/pla/vol9_2_04/pla06204.htmEn caché - SimilaresHas publicado que a
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de HR González - 2004 –
www.actiweb.es/invitroperu/medios.html
