2.1 Medios de cultivo
Los medios de cultivos de tejidos vegetales
es un proceso por el cual se trae material vegetal in vivo y se coloca en un medio de cultivo
estéril; para ello es necesario la disección microscópica de la planta bajo
condiciones higiénicas con el propósito de transferir su punto de crecimiento o
tejido que crece activamente; es decir tejidos meristemáticos, dentro de un
recipiente estéril sin introducir microorganismos contaminantes. El crecimiento
y desarrollo de estas células y tejidos dependerá de los objetivos del cultivo
de tejidos.
2.1.1 Áreas de laboratorio de cultivo de
tejidos
El laboratorio para realizar el cultivo de
tejidos presenta varias áreas especializadas para cada uno de los procesos.
AREA DE PREPARACIÓN
FUNCIÓN: aquí se realiza la preparación de
los medios de cultivo.
MATERIAL:
o Materiales de vidrio: vasos de precipitado,
frascos elermeyer (125, 250 y 500 ml)
o Material de plástico: probeta graduada
o Reactivos
EQUIPO: balanza analítica, medidor de pH,
platos calientes con agitación, refrigerador, incubadora, cámara de
crecimiento, potenciómetro, plancha eléctrica con agitador magnético.
AREA DE LAVADO Y DE ESTERILIZACIÓN
FUNCIÓN: en este espacio se realiza el lavado
y la esterilización del material a utilizar para la preparación de los medios
de cultivo.
MATERIAL PARA EL AREA DE LAVADO: Lavadero,
agua caliente, agua fría y agua destilada, basurero para el material vegetal,
inorgánico y de vidrio que se desechen, gradillas para el secado
MATERIAL PARA EL AREA DE ESTERILIZACION:
Autoclave (olla de presión), estufa, lavadero, destilador de vidrio
AREA DE TRANSFERENCIA
FUNCIÓN: en esta área se realiza el trabajo
de excisión, inoculación y transferencia del material vegetal (explantes) a los
medios de cultivo.
MATERIAL: tubos de ensayo de boca angosta,
navaja o bisturí, mesas, instrumentos de disección, frascos con alcohol,
máscaras, mechero de alcohol, bandejas, guantes, marcadores de aceite, bote de
basura.
EQUIPO: gabinetes de flujo laminar,
microscopio.
AREA DE INCUBACION
FUNCIÓN: en esta parte del laboratorio se
realiza la incubación, es importante que se encuentre a temperatura constante
MATERIAL: gradillas para tubos
EQUIPO: cámara de crecimiento, estanterías
metálicas o de madera para colocar los cultivos, aire acondicionado
AREA DE OBSERVACIÓN Y EXAMEN
FUNCIÓN: en esta área se lleva a cabo el
análisis periódico de los cultivos realizados
EQUIPO: microscopio, estereoscopio.
AREA DE CRECIMIENTO
FUNCIÓN: una vez que los cultivos pasaron al
área de incubación, las plantas son trasplantadas en un recipiente;
posteriormente son llevadas a un sitio propiamente acondicionado y cubierto en
el techo con una maya.
MATERIAL: macetas, suelo, bandejas.
EQUIPO: aire acondicionado, cámaras húmedas
de plástico
AREA DE CUARENTENA Y CONTROL FITOSANITARIO
FUNCIÓN: esta es el área de recepción de las
muestras o plantas contaminadas (virus, bacterias, hongos) destinadas a la
limpieza clonal; para ello se encuentra protegida de insectos; cabe mencionar
que es un espacio separado del laboratorio para evitar la infestación de otras
muestras.
BIBLIOGRAFÍA
Roca M. William y Mroginski
A. Luis. 1991. Cultivo
de tejidos en la agricultura fundamentos y aplicaciones. Editorial CiAT (centro
internacional de agricultura tropical).Colombia. pgs 953.
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