SEP SNEST DGEST
INSTITUTO TECNOLÓGICO
DE CIUDAD ALTAMIRANO.
PRÁCTICA NO. 2
“PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRES”
QUE PRESENTAN:
FLOR DEL CARMEN DORANTES NAVA
ZULAI ESPINOZA AVIANEDA
LUIS ANTONIO FLORES HERNÁNDEZ
FANNY IMELDA PASTENES
FELIZOLA
DEYANIRA VERGARA PÉREZ
LICENCIATURA EN BIOLOGÍA
CIUDAD
ALTAMIRANO, GRO. MÉXICO. 20 FEBRERO DEL 2012
Con la aplicación de la técnica de micro propagación de plantas, se amplían las perspectivas de obtención de material vegetal con mejor calidad agronómica y en cualquier época del año (Alberti et al. 1992). Para el desarrollo de esta técnica, deben considerarse aspectos fundamentales, como la procedencia, selección y desinfección del explante, así como la composición de los medios de cultivo a utilizar en cada una de las etapas y las condiciones de crecimiento (Navarro y Perea 1996).
Uno de los mayores usos del cultivo de tejidos es la propagación vegetativa de plantas con el fin de disponer de gran cantidad de material vegetal fitosanitariamente sano (Pasqual y Ferreira 2007).
“PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRES”
1Dorantes N.F.C., 1Espinoza
A.Z., 1Flores H.L.A., 1Pastenes F. F. I., 1 Vergara P.D.
1Instituto
Tecnológico de Cd. Altamirano
RESUMEN
El presente trabajo se llevó
a cabo en el laboratorio de microbiología del tecnológico de Cd. Altamirano,
teniendo como objetivos conocer los diferentes componentes del medio de cultivo
y su naturaleza química y bioquímica, así como manejar las técnicas básicas a
través del uso adecuado de reactivos y por último comprender la importancia
nutricional de los componentes de los medios de cultivo. Para ello fue
necesario realizar los cálculos de los sulfatos, se prosiguió a pesar cada una
de las sustancias en la balanza analítica, posteriormente se agregaron cada una
de éstas a un vaso de precipitado con 100ml de agua destilada, disolviendo
hasta formar una solución homogénea, a continuación se aforó la solución a
200ml; por último se vació a un botella color ámbar y se guardó ésta en el
refrigerador.
Palabras claves: soluciones stock, reactivos, sulfatos, balanza
analítica.
ABSTRACT
This work was
carried out in the microbiology
laboratory of Ciudad Altamirano
technology, with the objective to know
the different components of culture
medium and the nature of chemistry
and biochemistry, and manage the basic techniques
through proper use of reagents and finally understand
the nutritional components of the culture media. This involved the calculations of sulfates, was continued despite each
of the substances on the
analytical balance, then added
each of them to a beaker with 100 ml distilled water,
dissolving to form a homogeneous
solution, then the solution
was decanted to 200ml
and finally emptied an amber bottle and stored it in the
refrigerator.
Keywords: stock
solutions, reagents, sulfates, analytical balance
INDICE
I.
ANTECEDENTE.......................................5
II.
DEFINICIÓN
DEL PROBLEMA..........................7
III. OBJETIVOS........................................8
IV.
JUSTIFICACIÓN....................................9
V.
FUNDAMENTO
TEORICO...............................10
VI.
MATERIALES
Y METODOS.............................12
6.1 identificación de sulfatos....................12
6.2 pesado de los sulfatos........................12
6.3 preparación de la solución....................12
VII. RESULTADOS.......................................13
7.1 informe escrito de las actividades.............13
7.2 pesado de los solutos..........................15
VIII.
CONCLUSIONES
Y RECOMENDACIONES..................16
8.1
conclusiones................................16
8.2
recomendaciones.............................16
IX.
BIBLIOGRAFIA......................................17
X.
ANEXOS.............................................18
I. ANTECEDENTES
Son muchos los componentes de un medio para cultivar material
vegetal "in vitro": por ejemplo, se encuentran las sales minerales que
incluyan todos los elementos esenciales tanto micro como macronutrientes, las
vitaminas tales como riboflavina, tiamina, piridoxina, ácido nicotínico, ácido
pantoténico, biotina, y ácido fólico. Aminoácidos tales como L-glutamina,
asparragina y cisteína, los hexitoles como mioinositol, hormonas y reguladores
del crecimiento, una fuente de carbono y un agente gelificante.
Un método de hacer menos tedioso el trabajo consiste en preparar
lo que se conoce como "soluciones madre" de algunos de estos
componentes. Estas soluciones tienen una concentración que suele ser 10, 100 e
incluso 1000 veces superior a la concentración final del medio. Su ventaja no
estriba sólo en el hecho de que hay que pesar menos veces cada vez que se
prepara el medio sino también la exactitud de la pesada ya que algunos
compuestos están tan diluidos en la solución final, que la pesada que habría
que hacer estaría por debajo de los límites de exactitud de las balanzas de
precisión.
Las soluciones madre se conservan en frio y en bote color ámbar
durante algunos meses, desechándose ante cualquier señal de precipitación. Se
suelen preparar soluciones madre de las sales minerales, los aminoácidos, hormonas,
vitaminas y hexitoles, mientras que la fuente de carbono y el agente gelificante
se pesan cada vez ya que se necesitan en cantidades muy elevadas y no se conservan
bien en solución. En el caso de las hormonas es mejor preparar una solución
madre de cada una de ellas y medir volúmenes determinados y congelarlos.
Desde el punto de vista práctico la preparación de soluciones
madres o stock tiene como finalidad evitar:
1. Pesar cada uno de los compuestos químicos que constituyen un
medio de cultivo, cada vez que se requiera elaborar, lo que implicaría evitar
demasiado tiempo en su preparación.
2. Inexactitud al pesar cantidades muy pequeñas de ciertos
compuestos químicos.
Otro aspecto importante que se debe considerar es la cantidad de
agua que se utilice para disolver las sales inorgánicas que constituyen las
soluciones stock y en general el medio de cultivo.
El agua debe ser destilada o bidestilada y necesariamente des
ionizada. (Kyte & Kleyn, 1996). Se han creados numeroso medios de cultivos
(medio basal), cuyas diferencias estriban en las cantidades y tipos de sales
empleadas.
II. DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
Para tener éxito el cultivo de tejidos vegetales es de suma
importancia colocar las soluciones en el medio de cultivo con las
concentraciones adecuadas, por esta razón es necesario que el alumno aprenda a
realizar las soluciones madre con las
cantidades de soluto y solvente requeridas en cada una de las soluciones, así
como también es necesario que se aprenda a realizar los cálculos matemáticos
correspondientes a cada una de las
soluciones para el medio de cultivo.
III. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Conocer la preparación de las soluciones stock para los medios
de cultivo ms.
OBJETIVO ESPECIFICO
·
Conocer los diferentes
componentes del medio de cultivo y su naturaleza Química y Bioquímica.
·
Manejar las técnicas básicas
a través del uso adecuado de reactivos.
·
Comprender la importancia
nutricional de los componentes de los medios de cultivo.
IV. JUSTIFICACIÓN
Las plantas requieren de
ciertos nutrientes para poder crecer y desarrollarse de manera satisfactorios, de
igual manera el cultivo de tejidos in vitro, requiere de ciertas condiciones y
nutrientes para su optimo desarrollo; las soluciones stock son de gran
importancia para la preparación de los medios de cultivo de tejido ya que estas
se encuentran en concentraciones que son requeridas para los cultivos
vegetales, por esta razón es importante que el alumno conozca la forma de
prepararlas, teniendo los conocimientos adecuado para realizar los cálculos
requeridos y manejo de éstas.
V. FUNDAMENTO TEÓRICO
El cultivo de tejidos ha sido considerado durante mucho tiempo
como una mezcla de ciencia y arte. Fue considerada inicialmente como una
técnica particularmente difícil de aprender. Sin embargo, estas dificultades de
los comienzos están hoy en día prácticamente superadas gracias a factores como
la disponibilidad de antibióticos, los medios de composición definida, las
instalaciones asépticas (salas de cultivo limpias, cabinas de flujo laminar,
incubadoras estériles), dispositivos de cultivo (botellas con tapones
filtrantes, placas de Petri ventiladas; avances técnicos y la aparición de un
buen número de compañías comerciales de suministro de medios, sueros, equipo
han hecho del cultivo celular una tecnología con buena reproducibilidad (Reina,
T Merlín 2003).
El fundamento teórico del cultivo in vitro es el concepto de la
totipotencialidad celular. La totipotencia es la capacidad que tiene una célula
somática de regenerar un planta completa e igual a la planta madre. (Radice, T.
et al 1983)
Diversas plantas de interés agroalimentario,
ornamental o manipuladas genéticamente, se propagan o regeneran
vegetativamente. Asimismo, en algunos casos es preciso emplear técnicas de
propagación vegetativa para erradicar infecciones por virus, lograr la
propagación de especies en las cuales es difícil hacerlo naturalmente, y para
introducir variaciones genotípicas que aumenten la calidad de los productos.
Con la aplicación de la técnica de micro propagación de plantas, se amplían las perspectivas de obtención de material vegetal con mejor calidad agronómica y en cualquier época del año (Alberti et al. 1992). Para el desarrollo de esta técnica, deben considerarse aspectos fundamentales, como la procedencia, selección y desinfección del explante, así como la composición de los medios de cultivo a utilizar en cada una de las etapas y las condiciones de crecimiento (Navarro y Perea 1996).
Uno de los mayores usos del cultivo de tejidos es la propagación vegetativa de plantas con el fin de disponer de gran cantidad de material vegetal fitosanitariamente sano (Pasqual y Ferreira 2007).
VI.
MATERIALES Y METODOS
6.1 Identificación de los
sulfatos
Los sulfatos necesarios para
la preparación del medio ms, fueron sulfato de magnesio, sulfato de manganeso,
sulfato de zinc y por último sulfato de cobre, cada uno de estos fueron
extraídos del cuarto de los reactivos.
6.2 Pesado de los sulfatos
Una vez identificado cada uno de los sulfatos, se prosiguió a
pesar en la balanza analítica 7.4g de
MgSO47H2O, .338g de MnSO44H2O,
.0172g de ZnSO47H2O y .0005g de CuSO45H2O,
cada uno de ellos por separado en una laminilla de aluminio para poder obtener
un pesado exacto y preciso
6.3 Preparación de la solución
Cuando se tuvieron los solutos pesados, posteriormente se
agregaron cada una de ellas a un vaso de precipitado con 100ml de agua
destilada, moviéndolas con un agitador con el fin de obtener una solución homogénea,
se prosiguió a aforarla en una probeta
graduada a 200ml; por último se vertió
la solución elaborada en una botella color ámbar y tapó con papel
aluminio e introdujo al refrigerador, hasta su próxima utilización.
VII. RESULTADOS Y DISCUSION
7.1 Informe escrito de las actividades
Primeramente se realizó los cálculos de la solución stock para el medio MS concentrados a 100X y a
una solución de 200ml para Sulfatos ver Fig. 1Para que una vez teniendo los cálculos se pudieran
pesar en la balanza analítica; esto se realizó de la siguiente manera aunada a los
siguientes datos:
MgSO4 7H2O --------------------------
0.370
MnSO4 H2O ----------------------------
0.0169
ZnSO4 7H2O ---------------------------
0.0086
CuSO4 SH2O --------------------------
0.000025
Fig.1 MgSO4, MnSO4, ZnSO4, CuSO4
CALCULOS DE LOS SULFATOS
7.2 Pesado de los solutos en la balanza analítica
Una vez que se obtuvo los resultados de los cálculos del medio
ms para realizar las soluciones stock se prosiguió a pesar cada uno de los
sulfatos cuidadosamente en la balanza
analítica de forma ordenada como se muestra en las figuras, posteriormente se
agregaron al vaso de precipitado que contenía agua destilada y se diluyo, para
posteriormente agregar el medio de sulfatos a la botella ÁMBAR. Ver Fig. 2.
Figura 2: pesado de los solutos
VIII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
7.1 Conclusiones
Se logró preparar una solución sulfatos de 200ml a con una
concentración de 100X exitosamente, aunque debido a las malas especificaciones
del profesor no se logró realizar la solución la primera vez, sino que esta se
realizó exitosamente en la segunda ocasión. Una vez tenida la solución de
sulfatos con la concentración
correspondiente, se puso en una botella de vidrio y se guardó en el
refrigerador a una temperatura de 4°C aproximadamente.
Con esta práctica se logró que el alumno aprendiera a preparar
las soluciones madre, también se aprendieron a realizar los cálculos
matemáticos necesarios para preparar la solución, así como la importancia que
tienen cada uno de los componentes en el medio de cultivo y lo que ocasiona si
nuestra solución no está concentrada en los parámetros establecidos para el
cultivo de tejidos vegetales, esto es de suma importancia ya que de esto va a
depender si nuestro tejido vegetal se desarrolle en nuestro medio in vitro.
7.2 Recomendaciones
Se recomienda que revisar varias veces los cálculos matemáticos
de las concentraciones de cada uno de los componentes de los medios de cultivo
ya que un error en el cálculo de alguno de los sulfatos cambia en gran medida
la concentración de nuestra solución, también se recomienda que el profesor
especifique bien las sustancias que se agregaran en cada uno de los compuestos
así también se recomienda a los alumnos llevar acabo todos pasos necesarios y
revisar el formato de la práctica, pedir ayuda al profesor en caso de tener una
duda en alguno de los pasos que se especifican en la práctica, de igual forma
se recomienda que se pesen exactamente cantidades adecuadas de cada uno de los
sulfatos, es importante que los sulfatos se diluyan bien para después aforarlos
en la concentración de agua destilada correspondiente.
IX. BIBLIOGRAFIA
- Gamborg, O.L., T. Murashige, T.A. Thorpe y I.K. Vasil. 1976. Plant Tissue Culture Media. In Vitro 12(7): 473-478.
- Ozias-Akins, P. y I.K. Vasil.
1985.
Nutrition of Plant Tissue Cultures. En: Cell Culture and Somatic Cell Genetics
of Plants, Ed. I.K. Vasil., V.2. pags. 129-147.
- Pierik, Ir. R.L.M.
1984. In vitro culture of Higher plants.
Department of Horticulture Agricultural
University, Wageningen, 107 pags.
- Reinert, J. y Yeoman, J.J. 1982. Plant Cell and Tissue Culture. A Laboratory Manual. Ed.Springer-Verlag, Berlín, 83 pags
- Street, H.E. y L.A.
Whiters. 1974. The anatomy of embryogenesis in culture. En: Tissue culture
& Plant Science. H.E. Street (Ed.) Ed. Acad. Press,
Londres, pp. 71-100.
X. ANEXOS
¿Qué es un medio de cultivo?
R= formulación químicamente definida, donde los explantes
(plantas) encuentran las condiciones para desarrollar su potencial intrínseco.
¿Qué es una solución stock?
R= solución concentrada
de nutrientes o de fitohormonas.
¿Sustancias para preparar un cultivo ms.?
R= Nitratos, Sulfaots, Quelatos, Po Bo Mo, Halogenos, Organicos,
A.N.A., Sacarosa, Phytagel.
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